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    動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒

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    分子式:
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    品名 規格 包裝 單價 貨期
    動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒 50T 660元 現貨
    動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒 100T 1155元 現貨
    性狀:
    試劑盒內容: 50T 100T
    RNase A 1ml 1ml×2
    蛋白酶K 1ml 1ml×2
    溶液A 10ml 20ml
    溶液B 10ml 20ml 
    漂洗液 15ml 15ml×2
    洗脫液 10ml 20ml 
    吸附柱 50個 100個
    收集管 50個 100個
    說明書 1份 1份
    質量標準:
    產品簡介:

    本試劑盒采用可以特異性結合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統,提取組織和細胞的基因組DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特有新型材料,能夠高效、專一吸附DNA,可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物。 提取的基因組DNA片段大,純度高,質量穩定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規操作,包括酶切、 PCR、文庫構建、Southern雜交等實驗。

    操作步驟:

    使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇,加入休積請參照瓶體上的標簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心。

    1、樣品的處理:

    a、細胞:取1×106-1×107個懸浮培養細胞,12000rpm離心1min收集細胞,貼壁細胞先用胰蛋白酶消化處理,再用預冷的PBS吹打成細胞懸液,然后12000rpm離心1min收集細胞,盡量除去上清,加200ul溶液A,振蕩至徹底混勻。

    b、組織:組織量不宜過大,一般不要超過25mg,可以使用勻漿器勻漿,最好用液氮研磨成粉末狀,再用預冷的PBS或無菌水充分懸浮,然后12000rpm離心1min收集細胞,盡量除去上清,加200ul溶液A,振蕩至徹底混勻。

    2、向懸浮液中加入20ul 的RNase A (10mg/ml),55℃放置15min。

    3、加入20ul 的蛋白酶K( 10mg /ml ),充分顛倒混勻,55℃水浴消化,細胞消化時間較短,組織消化時間較長,一般需要1-3個小時才能完成(鼠尾需要消化過夜)。消化期間可顛倒離心管混勻數次,直至樣品消化完全為止。消化完全的指標是:液體清亮及粘稠。

    4、加入200ul體積溶液B,充分顛倒混勻,如出現白色沉淀,可放置于75℃ 15-30min,沉淀即會消失,不影響后續實驗。如溶液未變清亮,說明樣品消化不徹底,可能導致提取的DNA量少及不純,還有可能導致堵塞吸附柱。

    5、加入200ul無水乙醇,充分混勻,此時可能會出現絮狀沉淀,不影響DNA的提取,可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中。

    6、12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

    7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇), 12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

    8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

    9、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會影響后續的實驗如酶切、PCR等。

    10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經65℃水浴預熱的洗脫液,室溫放置5min,12000rpm離心2min。

    11、可將離心所得洗脫液再加入吸附柱中,12000rpm離心2min,即可得到高質量的基因組DNA。

    貯存:
    室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復檢期12個月,2℃-8℃保存時間更長。
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